第四节　凝血因子检验技术

一、凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ活性测定

凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ活性测定（factor Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻactivity，FⅧ：C、Ⅸ：C、Ⅺ：C、Ⅻ：C）是内源凝血系统疾病诊断的主要依据。

【检验原理】

一期法。稀释的正常或受检者血浆与乏因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ）血浆混合，做活化的部分凝血活酶时间测定。将受检者血浆测定的结果与正常血浆作比较，分别计算受检血浆中所含因子Ⅷ：C、Ⅸ：C、Ⅺ：C和Ⅻ：C相当于正常人的百分率。

【检验方法学】

1.试剂

（1）缺乏因子Ⅷ：C、Ⅸ：C、Ⅺ：C和Ⅻ：C 的基质血浆：先天性或人工制备的缺乏上述因子的血浆（要求相关因子的活性 ＜ 1%），冻干保存。

（2）脑磷脂悬液：用兔脑或人脑制作脑磷脂悬液，临用时用生理盐水作1：100稀释，必要时可调整稀释度。

（3）5g/L白陶土生理盐水悬液。

（4）咪唑缓冲液（pH 7.3）：甲液：咪唑l.36g，氯化钠2.34g溶于200ml蒸馏水中，再加0.1mol/L盐酸溶液74.4ml，最后加蒸馏水至400ml；乙液：0.13mol/L枸橼酸钠溶液；工作液：甲液5份加乙液l份混合而成。

2.标准曲线的绘制

将正常人新鲜混合血浆，用咪唑缓冲液作 1：10，1：20，1：40，1：80，1：160 稀释。各种稀释度的样品分别与缺乏因子基质血浆、脑磷脂悬液及0.5%白陶土生理盐水悬液各0.1ml混匀，置37℃预温2分钟，加0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml，轻轻摇动，直至血浆凝固，记录凝固时间。以凝固时间的对数和浓度（1：10为100%）的对数，计算回归方程，或以稀释度为横坐标，凝固时间为纵坐标，在双对数纸上绘制标准曲线。

3.检验方法

（1）空白测定管：

取基质血浆、咪唑工作液、脑磷脂悬液及0.5%白陶土生理盐水液各0.1ml，混匀，测定方法同上。要求空白管测定时间为240～250秒钟。凝固时间的长短可用脑磷脂液的浓度来调节。

（2）受检标品检测：

取置于冰浴中的受检者枸橼酸盐抗凝血浆，以咪唑工作液作l：20稀释，测定方法同上。然后将其凝固时间代入回归方程或查标准曲线，得出各因子活性再乘以2。若凝固时间过长，则应减少稀释倍数，以使凝固时间处于标准曲线的线性范围内。

【方法学评价】

本检测对采血及离心要求甚高。采血要求顺利，以免组织损伤，凝血因子被体外活化。其次，受检样品必须及时送实验室，以1 500×g离心20分钟，4小时内完成检测。

【质量保证】

1.乏因子基质血浆所缺乏的相应凝血因子水平应小于1%，而其他凝血因子水平必须正常。

2.受检样品应立即测定或可分离血浆后置于-40～-20℃冰箱中2～3个月内待测，避免反复冻融。

3.每次检测都应制作标准曲线，正常人标准血浆的制备要求30人以上的混合血浆，分装后在-40～-20℃下可保存2～3个月。

【参考范围】

因子Ⅷ：C 103.0%±25.7%；因子Ⅸ：C 98.1%±30.4%，因子Ⅺ：C 100.0%±18.4%；因子Ⅻ：C 92.4%±20.7%。

【临床意义】

1.血浆中因子Ⅷ：C、Ⅸ：C、Ⅺ：C和Ⅻ：C活性水平增高

主要见于高凝状态和血栓性疾病，尤其是静脉血栓形成性疾病。

2.血浆中因子Ⅷ：C、Ⅸ：C、Ⅺ：C和Ⅻ：C活性水平下降

因子Ⅷ：C下降见于血友病A；因子Ⅸ：C下降见于血友病B；因子Ⅺ：C减低见于因子Ⅺ缺乏症、肝脏疾病和DIC等；因子Ⅻ：C下降见于先天性因子Ⅻ缺乏症（Hageman特征）、DIC和肝脏疾病等。

二、凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ活性测定

凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ活性（factorⅡ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ activity，Ⅱ：C、Ⅴ：C、Ⅶ：C、Ⅹ：C）测定是外源凝血系统疾病诊断的主要依据。

【检验原理】

一期法。受检血浆分别与乏因子Ⅱ：C、Ⅴ：C、Ⅶ：C、Ⅹ：C的基质血浆混合，作凝血酶原时间测定。将受检者血浆测定的结果与正常血浆作比较，分别计算受检血浆中所含因子Ⅱ：C、Ⅴ：C、Ⅶ：C和Ⅹ：C相当正常人的百分率。

【检验方法学】

1.试剂

（1）乏因子Ⅱ：C、Ⅴ：C、Ⅶ：C、Ⅹ：C 的基质血浆：先天性或人工制备的缺乏这些因子的血浆（要求它们的活性小于l%），冻干保存。

（2）兔脑或人脑浸出液。

（3）0.025mol/L氯化钙溶液。

2.检验方法

（1）将乏因子血浆0.1ml、稀释20倍后的受检血浆0.1ml、兔脑或人脑浸出液0.1ml，相加混匀。

（2）37℃温育30秒，加入0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，轻轻摇动直至血浆凝固，记录凝固时间。

3.标准曲线的制作

（1）取至少30人份正常人的血浆充分混合，以10倍稀释作为100%，然后进行倍比稀释，使成50%，25%，12.5%和6.25%。

（2）按检验方法操作步骤（2），分别测定各稀释度的凝固时间（秒）。

（3）将所测凝固时间（秒）为纵坐标，正常人混合血浆不同水平因子的活性（%）作横坐标，在双对数纸上绘出标准曲线或建立回归方程。

（4）计算：受检血浆所测得的凝固时间（秒），通过标准曲线或回归方程，得出相当于正常人因子活性的百分率，并将该值乘以2，即为受检血浆凝血因子活性的水平（%）。

【方法学评价】

同凝血因子Ⅷ：C、Ⅸ：C、Ⅺ：C和Ⅻ：C测定。

【质量保证】

同凝血因子Ⅷ：C、Ⅸ：C、Ⅺ：C 和Ⅻ：C。

【参考范围】

因子Ⅱ：C 97.7%±16.7%；因子Ⅴ：C 102.4%±30.9%；因子Ⅶ：C 103%±17.3%；因子Ⅹ：C 103%±19.0%。

【临床意义】

1.因子Ⅱ：C、Ⅴ：C、Ⅶ：C、Ⅹ：C的水平增高

同因子Ⅷ：C、Ⅸ：C、Ⅺ：C和Ⅻ：C测定，但肝脏疾病除外。

2.因子Ⅱ：C、Ⅴ：C、Ⅶ：C、Ⅹ：C活性下降

见于先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症；获得性减低者见于维生素K缺乏症、肝脏疾病、DIC和口服抗凝剂等。血液循环中存在上述凝血因子的抑制物时，这些因子的血浆活性也可减低。

三、纤维蛋白原测定

纤维蛋白原（fibrinogen，Fg）是一种急性反应相蛋白，在多种疾病中可导致其水平升高或下降。

（一）双缩脲法

【检验原理】

用12.5%亚硫酸钠溶液将血浆中的纤维蛋白原沉淀分离，然后以双缩脲试剂显色。

【检验方法学】

1.试剂

（1）12.5%的亚硫酸钠（Na₂SO₃·7H₂O）溶液。

（2）双缩脲试剂：23%氢氧化钠溶液180ml，加1%硫酸铜溶液 60ml。

（3）抽取3ml静脉血液置肝素或EDTA抗凝管中，1 500×g离心15分钟，分离血浆。

2.检验方法

（1）按表6-2操作。

混匀后，置37℃水浴中10分钟，离心，弃去上清液。取沉淀物，再加12.5%亚硫酸钠溶液5ml，捣碎沉淀物，再次离心，弃去上清液，将离心管内沉淀物倒置在滤纸上吸干。

（2）按表6-3操作。

充分混匀，置37℃水浴中15分钟后比色，在540nm处，以B管校正零点，读出u管及S管数值。

（3）血浆 Fg含量（g/L）=U/S×0.3×10。

【方法学评价】

本法在沉淀纤维蛋白原过程中可导致受检样品中纤维蛋白原人为丢失，故灵敏度和准确度均较差。

【质量保证】

1.抽血需顺利，抗凝应完全。

2.纤维蛋白原的沉淀过程必须严格按照操作要求，以防受检样品中该物质含量人为丢失而导致结合假性下降。

【参考范围】

2～4g/L。

【临床意义】

1.纤维蛋白原增高

见于糖尿病和糖尿病酸中毒、动脉粥佯硬化、急性心肌梗死发作期、急性传染病、结缔组织病、急性肾炎和尿毒症、放射治疗后、灼伤、骨髓瘤、休克、外科大手术后、妊娠晚期和妊娠高血压综合征、轻型肝炎、败血症、急性感染和恶性肿瘤等。

2.纤维蛋白原下降

见于弥散性血管内凝血和原发性纤溶症、重症肝炎和肝硬化等，也见于降纤治疗（如抗栓酶、去纤酶）和溶栓治疗（如UK，t-PA），故也是上述药物的监测指标之一。

（二）Clauss法（凝血酶法）

【检验原理】

根据纤维蛋白原与凝血酶作用最终形成纤维蛋白的原理。以国际标准品为参比血浆制作标准曲线，用凝血酶来测定血浆凝固时间，所得凝固时间与血浆中纤维蛋白原浓度呈负相关，从而得到纤维蛋白原的浓度。

【检验方法学】

1.试剂

凝血酶（冻干），参比血浆（冻干），血浆稀释液。

2.检验方法

（1）取2ml蒸馏水复溶凝血酶。

（2）将待测或参比血浆用血浆稀释液作10倍稀释。

（3）取已稀释的血浆0.2ml于一玻璃小试管中，置37℃温育2分钟，加入已复溶的凝血酶试剂0.1ml，轻轻摇动试管，直至血浆凝固，记录凝固时间。

（4）重复上述操作，取两次结果的平均值。

（5）如遇有凝固时间长的样品，使2次结果间误差较大，可用1：5的稀释血浆进行操作，将结果除以2再报告结果。

（6）根据凝固时间（秒）查阅标准曲线读数表，即可获得血浆纤维蛋白原浓度（g/L）。

【方法学评价】

本法灵敏度和准确性均较佳，现已在临床广泛使用，但由于纤维蛋白原的异质性，当F（g）DP增高时，Clauss法测定结果将受影响。

【质量保证】

1.参比血浆应同时与样品一起操作，以检验结果的可靠性。

2.凝血酶原复溶后在4～6℃可放置2天。

3.凝固时间延长，查得纤维蛋白原浓度降低可有以下情况：①血浆纤维蛋白原浓度真正降低；②血浆纤维蛋白原浓度假性降低，即由于血浆中存在肝素、F（g）DP或异常纤维蛋白原血症所致，可用其他方法再行检测以证实之。

【参考范围】

2～4g/L。

【临床意义】

同双缩脲法。

四、组织因子测定

血液循环中组织因子（tissue factor，TF）水平在血栓前状态和血栓病的发生和发展中起着至关重要的作用。

（一）组织因子抗原测定（TF：AG）

【检验原理】

ELISA法。以鼠抗人TF单克隆抗体作为捕获抗体，将组织或血浆样品加至预先包被的酶标板孔中，以生物素标记的第二抗体（检测抗体）特异识别已结合的TF，然后加辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素形成双抗体夹心酶联免疫复合物。加入底物 3，3′，5，5′-四甲基联苯胺（TMB）后，辣根过氧化物酶与之反应生成蓝色化合物，以硫酸终止反应，形成黄色化合物。TF水平通过测定其在450nm处吸光度值，并通过标准曲线计算而获得。

【检验方法学】

1.试剂

（1）6×19孔预包被微量测试排条。

（2）TF 标准：0～1 000pg/ml（冻干）。

（3）检测抗体：生物素标记的抗人 TF F（ab’）₂（冻干）。

（4）酶标物：辣根过氧化物酶标记的链霉素亲和素。

（5）酶标物稀释液。

（6）底物 TMB。

（7）去污剂：25% TritonX-100。

（8）PBS（0.01mol/L，pH 7.4）。

2.试剂准备

（1）标准品：分别向 50，100，200，500 和 1 000pg/ml标准品瓶中加1.0ml蒸馏水，向0pg/ml标准品瓶中加2.0ml蒸馏水，轻摇3分钟。

（2）检测抗体：每瓶加5.5ml蒸馏水，轻摇3分钟。

（3）酶标物稀释液：加入55ml蒸馏水，混匀。

（4）洗涤缓冲液：将PBS溶于900ml蒸馏水中，加4ml去污剂，混匀，用蒸馏水补充体积至1L。

（5）样品缓冲液：加BSA至洗涤缓冲液中，使成1%浓度。

3.样品准备

（1）组织样品：将冰冻组织样品研磨成粉末（净重100～300mg）溶于1.8ml组织缓冲液（pH8.5）中，加 0.2ml 1%Triton-100至上述组织缓冲液中，使成1% Triton-100，于4℃置12小时。取出100 000×g，4℃离心60分钟，以分离细胞碎片。倒出上清液/组织提取液，并测定蛋白总量，必要时，用组织缓冲液调整总蛋白浓度至2～3mg/ml。将提取液分装成100µl的小包装，检测时用样品稀释液以1：20稀释组织提取液，暂不测定样品则保存于-80℃或液氮中。

（2）组织培养上清液样品：用样品缓冲液按1：5稀释样品。

（3）血浆：以0.129mol/L枸橼酸钠作1：9抗凝，1 500×g离心10分钟，分离血浆后冻存。

4.检验方法

（1）从银箔袋内取适量微量测试排条，并安置于托板上，其余重新封存，并于其中放置干燥剂，然后保存于2～8℃。

（2）每孔加100µl的TF标准品或稀释样品，室温下放置3小时或湿盒中置4℃过夜，强调应设复孔。

（3）用洗涤缓冲液洗板4次。

（4）每孔加100µl检测抗体，室温下放置1小时。

（5）用洗涤缓冲液再洗涤4次。

（6）将10µl酶标溶液溶于10µl稀释剂中，每孔加100ml稀释的酶标溶液，室温置1小时。

（7）用洗涤缓冲液洗板4次。

（8）每孔加100µl底物溶液，室温下置20分钟。

（9）加50µl 0.5mol/L H₂SO₄终止反应。轻敲排条以确保H₂SO₄充分混匀。最后将检测板置于酶标仪上，450nm波长处测定吸光值（扣除微量板本身的吸光值）。

5.以TF浓度（pg/ml）为横坐标，相应450nm吸光度值为纵坐标，建立标准曲线，根据标准曲线得出样品值，将该值乘以稀释倍数，即可得出受检样品中TF的浓度。

【方法学评价】

本法灵敏度极高，其检测下限为10pg/ml。但其耗时较长，从而限制了在临床被广泛应用。

【质量保证】

1.采血须顺利，避免组织中的TF混入血液，从而导致结果不准确。

2.孵育时间及洗板过程必须严格按照操作规程，以避免抗原抗体反应不完全及酶标记物非特异性地吸附于测定孔而影响检测结果。

【参考范围】

血浆：（149±72）pg/ml。组织及组织培养液样品组织因子参考范围尚待建立。

【临床意义】

血栓前状态及血栓病患者TF水平明显增高，此外，在系统性应激反应综合征（如内毒素血症、严重创伤、休克等）及DIC等TF水平也增高。

（二）组织因子活性测定（TF：A）

【检验原理】

凝固法。应用内毒素刺激后的全血复钙时间测定来检测TF促凝活性，即在抗凝全血中加入或不加入内毒素，并于37℃温育，然后复钙检查全血凝固时间，根据全血凝固时间缩短的程度（ΔS）来判断TF促凝活性的强弱。

【检验方法学】

1.试剂

内毒素、脑组织凝血活酶。

2.仪器

半自动血凝仪。

3.检验方法

取9：1抗凝的枸橼酸钠抗凝全血4ml，分别平均注入2支塑料管内，并标明测定管和对照管，在测定管内加入内毒素，浓度为10µg/ml全血，对照管加入相同体积的咪唑缓冲液，置37℃水浴4小时，取出，各加入0.1mol/L氯化钙溶液，于半自动血凝仪上进行全血复钙时间测定。此称刺激后凝固时间。检测应做复管，取平均值。

4.计算

测定管和对照管全血复钙时间差值取平均值，结果以TF促凝活性ΔS或以凝固缩短时间表示。

【方法学评价】

本法具有良好的灵敏度和准确性，且具有良好的重复性（CV=8.23%±3.98%），是目前检测组织因子促凝活性的首选方法。

【质量保证】

同TF抗原测定

【参考范围】

测定管减对照管，全血复钙时间的差值为30.4±25.1ΔS。

【临床意义】

同组织因子抗原测定。

五、纤维蛋白原片段1+2测定

本检测为凝血因子分子标志物，是血栓性疾病的重要诊断指标之一。

【检验原理】

ELISA法。以抗F₁₊₂抗体包被酶标板，加入标准品或样品后，再加入过氧化物酶标记的第二抗体，与游离F₁₊₂抗原决定簇结合。H₂O₂与发色基质间的酶促反应用硫酸终止，溶液颜色的深浅与样品中F₁₊₂含量成正比。

【检验方法学】

1.试剂

（1）EnzygnostF₁₊₂测试板：兔抗人F₁₊₂抗体预包被。

（2）抗纤维蛋白原/过氧化物酶标记物。

（3）标记物缓冲液：Tris缓冲液，含 Tween，BSA。

（4）F₁₊₂标准品：S₁～S₄浓度为 0.04～10nmol/L。

（5）F₁₊₂质控血浆。

（6）样本缓冲液：Tris缓冲液，含 Tween-NaCl。

（7）洗涤液：磷酸盐缓冲液（90mmol/L），含 Tween 18g/L。

（8）底物缓冲液：枸橼酸-磷酸缓冲液，含0.3g/L H₂O₂。

（9）发色底物：邻苯二胺。

（10）终止液：0.5mmol/L H₂SO₄。

2.试剂和样品准备

（1）将15ml洗涤缓冲液溶于300ml蒸馏水中。

（2）加200µl抗纤维蛋白原/过氧化物酶标记物至标记缓冲液（11ml）瓶中，振荡混匀。

（3）用 1ml蒸馏水将标准品 S₁～S₄配成 0.04、0.2、2、10nmol/L F₁₊₂浓度。

（4）受检全血用0.12mol/L枸橼酸钠作9：1抗凝，1 500×g离心10分钟，取上层血浆。

3.检验方法

（1）根据受检样品多少，取适量测试排条并置于托板上，其余的重新封存，并于其中放干燥剂，保存于2～8℃。

（2）每孔加50µl样本缓冲液，再各加50µl标准品、质控和待检样本，充分混匀，37℃温育30分钟。

（3）用0.3ml稀释洗涤液洗板2次后，每孔各加100µl酶标记物，37℃温育15分钟。

（4）在温育结束前，加10ml底物缓冲液至含发色底物的瓶中，振荡混匀。

（5）用洗涤液再洗板3次后甩干，每孔各加100µl发色底物，20～25℃避光温育15分钟。

（6）各加100µl终止液，1小时内在酶标仪492nm处测定吸光度值。

4.标准曲线的绘制

以F₁₊₂标准品（0.04～10nmol/L）为横坐标，492nm吸光度值为纵坐标，在双对数纸上绘制标准曲线。根据标准曲线可查得样本中F₁₊₂浓度。

【方法学评价】

本法灵敏度和特异性均较佳，且操作相对简便。

【质量保证】

1.采血须顺利，以防止凝血因子的体外活化。

2.孵育时间及洗板过程必须严格按照操作规程，以避免抗原抗体反应不完全及酶标记物非特异性地吸附于测定孔而影响检测结果。

【参考范围】

0.4～1.1nmol/L。

【临床意义】

1.血浆F₁₊₂升高

见于深静脉血栓形成、肺栓塞、DIC及遗传性蛋白C缺陷症等。

2.血浆F₁₊₂减低

见于口服抗凝剂患者，因此标本检测也可作为口服抗凝剂的监测指标。

六、可溶性纤维蛋白单体复合物测定

可溶性纤维蛋白单体复合物（soluble fibrin monomer complex，SFMC）为凝血酶的标志物，是判断高凝状态的有效指标。

【检验原理】

ELISA法。用抗纤维蛋白单克隆抗体，根据双抗体夹心法的原理，测定血浆SFMC含量。

【检验方法学】

1.试剂和仪器

（1）氨基醋酸：终浓度为20g/L。

（2）抑肽酶：终浓度为500U/ml。

（3）碳酸盐缓冲液：0.1mol/L（pH 9.6）。

（4）抗纤维蛋白原IgG单克隆抗体。

（5）0.01mol/L PBS 洗涤液，内含 0.05% Tween-20。

（6）磷苯二胺溶液（1g/L）。

（7）辣根过氧化物酶标记的抗纤维蛋白原抗体。

（8）酶标仪。

2.检验方法

（1）静脉采血 5ml，以 0.15mol/L EDTA-Na₂作 9：1抗凝，加入终浓度为20g/L氨基醋酸和500U/ml抑肽酶溶液，1 500×g离心15分钟，分离血浆，置-20℃保存备用。

（2）用0.1mol/L的碳酸盐缓冲液（pH 9.6）将抗纤维蛋白原IgG单克隆抗体稀释成10mg/L，加0.1ml于酶标板各孔或放射免疫法杯中，置4℃过夜。

（3）用 0.01mol/L PBS（含 0.05% Tween-20）洗涤 3次，再于各孔内加入1% BSA 0.2ml封闭，于37℃温育2小时。

（4）将受检血浆或用0.01mol/L PBS作系列稀释的标准品，分别加0.1ml于各孔内，37℃温育2小时，洗涤3次。用洗涤液将辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体稀释3 000倍，或将125I-SZ65每毫升每分钟的脉冲数调整到200 000，然后于上述各孔中各加0.1ml，37℃温育2小时，洗涤3次，甩干，于各孔中加入磷苯二胺溶液（1g/L）0.2ml，显色10分钟，在波长为492nm处测各孔吸光度值，或将含125I的放射免疫法杯置于闪烁计数器上检测放射性强度。

3.标准曲线的绘制

以标准品各浓度值为横坐标，相应的吸光度值或放射性强度为纵坐标，在半对数坐标纸上绘制标准曲线。根据样品的吸光度值或样品放射性计数占最高标准点计数的百分结合率，从相应的标准曲线上查出稀释样品的SFMC值，再乘以稀释倍数，即得血浆样品中的含量。

【方法学评价】

本法灵敏度高、特异性强，是目前检测SFMC的首选方法。

【质量保证】

1.采血须顺利，抗凝须完全，以避免凝血因子的体外活化。

2.温育及洗涤过程必须严格按照操作规程进行，以避免抗原抗体反应不完全及酶标记物（或放射性标记物）非特异性地吸附于测定孔而影响检测结果。

【参考范围】

1.酶联免疫法

（48.5±15.6）mg/L。

2.放射免疫法

（50.5±26.1）mg/L。

七、凝血因子测定

本检测是诊断先天性或获得性因子缺陷的主要依据。

（一）凝血因子定性测定

【检验原理】

尿素或单氯（碘）醋酸法。在Ca2+的参与下，因子能使可溶于5mol/L尿素或2%单氯（碘）醋酸溶液的可溶性纤维蛋白聚合物变为交联纤维蛋白。因此，含因子的血浆凝固后不溶于上述溶液。如果受检血浆中缺乏因子，则聚合物可溶于5mol/L尿素溶液或2%单氯（碘）醋酸。

【检验方法学】

1.试剂

（1）5mol/L 尿素溶液：尿素 30g，加蒸馏水至 100ml；或2%单氯（碘）醋酸溶液。

（2）0.025mol/L氯化钙溶液。

2.检验方法

（1）将患者全血与0.109mol/L枸橼酸钠溶液作9：1抗凝，1 500×g离心15分钟，分离血浆备用。

（2）受检血浆0.1ml，加入0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，混合后置37℃水浴中，使凝块形成。

（3）先每5分钟观察1次，共2小时，以后2～4小时观察1次，共24小时，看血浆凝块有否溶解。

【方法学评价】

本法是因子检测最为简便和特异的方法，但灵敏度较差。

【质量保证】

1.采血须顺利，抗凝要完全，应避免样品溶血。

2.采血后应立即检测，样品不宜久置。

【参考范围】

24小时内纤维蛋白凝块在37℃水浴中不溶解。

【临床意义】

若纤维蛋白凝块在24小时内（尤其在2小时内）完全溶解，提示患者存在因子先天性或获得性缺陷。获得性缺陷者见于肝病、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、淋巴瘤、转移性肝癌、恶性贫血、弥散性血管内凝血及原发性纤溶等。

（二）凝血因子活性测定

【检验原理】

尿素或单氯（碘）醋酸法。根据未经因子a作用的纤维蛋白单体聚合物可以溶解于2%单碘（氯）醋酸或5mol/L尿素溶液的原理，以受检血浆对缺乏因子基质血浆的纠正程度来测定受检血浆中因子的活性。

【检验方法学】

1.试剂

（1）乏因子基质血浆：因子活性小于l%，使用生理盐水溶解。

（2）正常人血浆：将30例以上经0.109mol/L枸橼酸钠抗凝血浆混合，并且在采血后2小时内置-30℃冰箱内储存，临用时融化。

（3）2%单碘醋酸溶液。

（4）0.025mol/L氯化钙溶液。

2.检验方法

（1）按表6-4用缺乏因子基质血浆对比稀释受检血浆。

（2）检测：在0.1ml稀释的血浆中，加0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，立即启动秒表计时，混匀并置于37℃水浴10分钟。然后再加入2%单碘（氯）醋酸溶液1ml，用力振荡，使血浆凝块完全脱离玻璃试管壁，再继续37℃温育2分钟，然后按表6-4自左至右逐管判断结果，最后一管凝块未溶解者即为因子活性（%）。

【方法学评价】

本检测特异性和敏感性均优于因子定性试验，可作为因子先天性或获得性缺陷诊断的首选方法。

【质量保证】

同因子定性试验。

【参考范围】

100%。

【临床意义】

同因子定性试验。

（李　健　张利伟）