第四节　阻断剂

一、免疫检测中的内源性干扰

任何免疫检测方法都有可能受到外源或内源性干扰出现假阳性或假阴性结果，其中内源性干扰往往是由于试剂中使用的抗体与样本中的内源性物质发生反应所致，消除干扰是免疫检测产品研发的重要任务。最易受到干扰的检测系统包括：双抗体夹心法、免疫竞争法、免疫比浊法。

（一）最常见的内源性干扰物质

1.类风湿因子（rheumatoid factor，RF）

①以变性IgG为靶抗原的自身抗体；②IgM、IgA、IgG、IgD、IgE五型中，68%～80%为IgM；③易与人和动物的变性IgG或免疫复合物中的IgG结合。

2.嗜异性抗体（heterophilic antibody，HA）

①与多种动物免疫球蛋白反应，特异性不强，亲和力较弱；②嗜异性抗体干扰的程度、频率与其浓度、亲和力以及检测系统有关。

3.人抗动物抗体（human anti animal antibody，HAAA）

①抗动物蛋白抗体，由医源性与非医源性引起，最常见的是人抗小鼠抗体（HAMA）；②不同物种的HAAA相互之间有交叉；③针对抗原明确，亲和力较强。

（二）内源性干扰的原理

1.双抗体夹心法

当靶抗原和捕获抗体及检测抗体结合时，产生信号。信号强度与样本中靶抗原的浓度成正比。阴性样本不发生干扰时，未结合的检测抗体被洗去，不会出现假阳性结果。

干扰抗体像桥梁一样连接捕获抗体和检测抗体，使检测抗体在没有靶抗原存在的情况下连接到固相上无法洗去，产生假阳性结果（图1-2-8）。

2.免疫竞争法

靶抗体和检测抗体竞争结合捕获抗原，产生信号，信号强度与样本中靶抗体的浓度成反比。阴性样本不发生干扰时，检测抗体结合到捕获抗原上，不产生假阳性结果。

干扰抗体和检测抗体结合，阻止其与捕获抗原结合而被洗去，信号减弱或无信号，产生假阳性结果（图1-2-9）。

（三）内源性干扰的解决方法

防止内源性干扰的解决方法包括加入免疫阻断剂、更换原料抗体的种属、改造检测抗体或捕获抗体或去除样本中的免疫球蛋白。最简单、最有效的方法，就是在检测系统中添加免疫阻断剂，直接阻断干扰物质与检测系统中抗体或抗原的结合。

二、阻断剂的分类

（一）主动阻断剂

一类对干扰抗体具有高亲和力的试剂。与干扰抗体结合后，可以通过位阻效应阻断干扰抗体与检测抗体或捕获抗体的结合。

（二）被动阻断剂

一般为正常动物血清或IgG，通过高浓度添加，使干扰抗体优先与阻断剂结合而不与检测抗体或捕获抗体结合，从而降低干扰。

（三）IgM检测专用阻断剂

检测前去除人血样本中RF因子和IgG，可以显著提高IgM检测的灵敏度和特异性。

（四）交联阻断剂

通过化学交联的方法将单体分子变为多聚物，利用空间位阻效应，有效提升阻断效果。