七、抗体鉴定常用检测技术及特殊试剂

1.LISS和PEG

与不存在增强介质的检测技术相比，LISS和PEG技术可以增强反应性并减少孵育时间。LISS通常用于试管法实验中，商品化的LISS和PEG可能还含有额外的增强介质。严格按照试剂说明书要求添加血清/血浆、LISS液或PEG并确保比例合适。LISS和PEG同时可以增强自身抗体，当同种抗体合并存在自身抗体时，情况将变得更为复杂。抗体鉴定常用的检测技术见表0-6。

2.凝集抑制试验

某些血型抗原以可溶性形式存在于体液中，如唾液、尿液和血浆。这些物质也存在于自然界中，也可人工合成。可溶性物质可用于抑制相应抗体的反应性，从而掩盖潜在的非中和性抗体的存在。如果怀疑存在某种抗体，使用可溶性物质抑制抗体的反应性能够帮助鉴定抗体。如怀疑存在抗P1但反应结果不明确时，在加入可溶性P1物质后凝集反应消失，可证明抗P1的特异性。抑制试验需要同时做盐水平行对照，只有当抑制试验结果为阴性、用等量体积的盐水代替可溶性物质的稀释对照品为阳性时，才能够解释抑制结果。

最常见的抑制物有：

1）Lewis物质：

有Lewis基因（FUT3）的个体，唾液中存在Lea或Leb物质，或两者均存在。Le（a+b-）表型的个体唾液中有Lea物质，Le（a-b+）表型的个体唾液中有Lea和Leb物质。也有商品化的Lewis物质可供选择。

2）P1物质：

包虫囊液和鸽子蛋卵清蛋白中存在可溶性P1物质。也有商品化的P1物质可供选择。

3）Sda物质：

许多体液中都存在可溶性Sda物质，但在尿液中浓度最高。为确定血清中是否存在抗Sda，可使用Sd（a+）个体的尿液来抑制抗体的反应性。

4）Chido和Rodgers物质：

大多数正常红细胞表面都有微量C4，而Ch和Rg抗原是存在于C4上的表位。IAT检测时，抗Ch和抗Rg会与C4反应。鉴定抗Ch和抗Rg有效的方法是用Ch和Rg抗原阳性的血浆抑制这些抗体的反应。虽然不是一种抑制技术，但血浆中的可溶性Ch和Rg物质可以用过量的C4d包被红细胞，这些包被的红细胞与抗Ch和抗Rg直接凝集，从而能够快速进行抗体鉴定。

3.特殊试剂

复杂抗体鉴定时，应用最多的是无花果蛋白酶和木瓜蛋白酶。酶可以使某些抗原破坏或减弱，例如MN、S、Fya、Fyb、JMH、Ch、Rg和Xga抗原，酶处理的红细胞与这些抗原对应的抗体不反应；相反，酶处理的红细胞与其他抗体反应会增强（如Rh、P1PK、I、Kidd和Lewis系统的抗体）。因此，酶技术可以用来分离混合抗体。例如标本中存在抗Fya和抗Jka时，会与许多红细胞试剂反应；若使用酶处理的红细胞试剂检测，抗Jka反应性仍然存在，因为Fya抗原被酶处理破坏，抗Fya反应性将消失。

免疫血液学参比实验室常常还会用到胰蛋白酶、α-糜蛋白酶和链霉素蛋白酶等。不同的酶以及酶处理方法可以改变或破坏某些抗原，有些抗原能被某种蛋白水解酶灭活，但不能被其他蛋白水解酶灭活。只与酶处理的红细胞反应的抗体是否具有临床意义仍值得商榷，这些“唯酶”抗体可能并不具有临床意义。

巯基试剂（如DTT和2-ME）能够裂解连接IgM五聚体单体亚单位的二硫键。完整的19S IgM分子被分裂成7S Ig亚单位，并改变血清学反应性。7S Ig单体的链内二硫键相对稳定，不受巯基试剂影响。

巯基试剂的应用包括：

1）确定抗体的免疫球蛋白类型。对于孕妇而言，IgG类抗体表明发生HDFN的可能性；

2）在IgM和IgG混合抗体中鉴定其特异性，特别是凝集的IgM抗体掩盖了IgG抗体的存在；

3）确定特异性抗体（如抗A或抗B）中IgM和IgG成分的相对含量；

4）使IgM类自身抗体引起的红细胞凝集消散；

5）使用DTT和蛋白水解酶混合试剂（ZZAP试剂）处理IgG致敏的红细胞，能够破坏IgG分子完整性，使其从红细胞膜上解离；处理后的红细胞经蛋白酶的作用可以增加反应敏感性（表0-7）。