第二章　细胞培养基本条件

高等生物由多细胞构成，整体条件下研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能十分困难。最好的方法是把活细胞从体内取出进行体外培养、观察和研究。但离体细胞必须在一定的生理条件下才能存活、表现特定功能，特别是高等动物细胞要求的生存条件极其严格，稍有不适就会死亡。所以，要选用最佳生存条件，以维持细胞在体外的生长、繁殖、结构和功能。维持细胞体外生存的必要条件包括：①无菌无毒的培养环境。无菌无毒的操作环境是保证体外细胞生存的首要条件。与体内相比，体外培养细胞丢失了对微生物和有毒物质的防御能力，所以一旦被污染或自身代谢物质积累，细胞就会中毒死亡。因此，在体外培养过程中，必须保持细胞的生存环境无菌无毒，并及时清除细胞代谢产物。②合适的细胞培养基。培养基为细胞提供了营养物质和细胞生长的促进物质，另外，它还为体外培养的细胞生长和繁殖提供生存环境，是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一。③高质量的血清。现在，大多合成培养基都需添加血清。血清含有细胞生长所需的多种生长因子和其他营养成分，是细胞培养液中最重要的成分之一。④恒定的温度和酸度。若要维持培养细胞旺盛生长，温度宜维持在37℃左右，pH宜保持在7.2～7.4。⑤适宜的气相环境。气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要为O2和CO2。其中，氧气参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长增殖，同时合成细胞生长所需用的各种成分。因此，体外培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳的混合气体环境中。